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厌氧培养箱的操作规程News

厌氧培养箱的操作规程
发布时间:2018-04-23 点击次数:529次

厌氧培养箱的操作规程

(一)操作室厌氧环境形成:
1. 按使用要求放置好必要的附件和器具;
2. 通电源开照明灯,开温控仪,调节所需温度;
3. 操作室内放入1000g钯粒(封闭)和500g干燥剂,并放入美兰指示纸(封闭);
4. 关紧取样室内外门,并抽真空校验;
5. 操作室内*次置换(氮气置换):
A. 把乳胶手套套在观察板法兰圈上并扎紧
B. 接通氮气进气路,打开氮气控制阀1,使手套鼓起,关闭阀门1,然后扎紧袋口;
6. 操作室第二次置换(氮气置换)重复一次充氮过程,取样室先抽真空,并注意随时用脚踏开关开闭排气。如此连续三次氮气置换。
7. 操作室第四次置换(混合气体置换):
(混合气体配比为N2 85%、H2 10%、CO2 5%)
A. 调换气路打开混合气阀3进气,充气时取样室先抽真空,并随时用脚踏开关开闭排气;
B. 关掉混合气体阀3,并打开阀5,使混合气体经过流量计,调整流量计,流量为每分钟10ml左右;
C. 混合气体重复2-3次转换,经过上述过程,基本形成厌氧环境。
8. 操作室内打开粑粒除氧剂,接通除氧催化器电源进行催化除氧,一小时后打开美兰指示纸观察其变况,不变色为操作室内达到厌氧环境;
9. 开紫外线灭菌灯,室内进行灭菌处理,灭菌时间按具体实验自定。
(二)菌种的置入和培养:
1. 检查取样室内门并关紧;
2. 打开取样室外门,将菌种放入取样室后即关上外门;
3. 取样室充氮置换三次过程:打开真空泵,先抽真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后人工打开氮气阀2进气,使指针回复零位,关掉阀2。第二次重复操作一次。第三次操作时,使真空度500ml汞柱(66kPa)以上停,然后打开阀4进混合气,使指针回复零位,关掉阀4。取样室充氮置换三次过程结束;
4. 如选定真空度较低就需要增加置换的次数;
5. 取样室外门开启、关紧,再抽低真空度100ml汞柱(13kPa)检验;
6. 厌氧培养箱需要长期连续使用的条件:
A. 每天在操作室内打开美兰指示纸观察,如不正常就必须重新换气;
B. 要长期连续输入微量的混合气体,使补进的氮气能和微量的氧结合通过催化吸收,保证室内厌氧状态,补入混合气流量选定为每分钟10ml左右;
C. 连续培养运行一天,更换一次除氧剂和干燥剂。
D. 操作室内温度可任意选择和控制。
7. 混合气瓶、氮气瓶输出压力调整:调节减压阀,使输出压力0.1Mpa左右。

厌氧培养箱的操作规程厌氧培养箱的使用注意事项

1.仪器尽可能地安装于空气清净、温度变化较小的地方;
2.开机前应全面熟悉和了解各组成配套仪器、仪表的使用说明,掌握正确使用方法;
3.培养物放入必须是在操作室内达到厌氧环境后放入;
4.如发生故障(停气等原因)操作室内仍可保持10小时厌氧状态(超过10小时则根据需要把培养物取出另作处理);
5.经常注意气路有无漏气现象;
6.调换气瓶时,注意要扎紧气管,避免流入含氧气体。
7. 真空泵按要求使用,定期检查加油。

厌氧菌培养方法

厌氧菌在有氧的情况下不能生长。要培养厌氧菌,必须创造一个无氧的环境。通常用培养基中加入还原剂,或用物理、化学方法去除环境中的游离氧,以降低氧化还原电势。如疱肉培养基、硫基乙酸钠培养基,牛心脑浸液培养基等。常用的厌氧培养方法有许多,可根据实际情况选用。
厌氧培养箱的操作规程  1.厌氧缸法接种好标本的平板或液体培养基试管,可放入厌氧缸内培养,厌氧缸是普通的干燥缸,用物理化学的方法使缸内造成厌氧环境,从而将厌氧菌培养出来。
  2.厌氧袋(Bio-bag)即在塑料袋内造成厌氧环境来培养厌氧菌。塑料袋透明而不透气,内装气体发生管(有硼氢化钠的碳酸氢钠固体以及5%柠檬酸安瓿)、美兰指示剂管、钯催化剂管、干燥剂。放入已接种好的平板后,尽量挤出袋内空气,然后密封袋口。先折断气体发生管,后折断美兰指示剂管,命名袋内在半小时内造成无气环境。如不突变表示袋内已达厌氧状态,可以孵育。
  3.厌氧手套箱(Anaerobie glove box)即厌氧培养箱,是迄今为止国际上公认的培养厌氧菌佳仪器之一。它是一个密闭的大型金属箱,箱的前面有一个有机玻璃做的透明面板,板上装有两个手套,可通过手套在箱内进行操作,故名。箱侧有一交换室,具有内外二门,内门通箱内先关着。欲放物入箱,先打开外门,放入交换室,关上外门进行抽气和换气(H2CO2N2)达到厌氧状态,然后手伸入手套把交换室内门打开,将物品移入箱内,关上内门。箱内保持厌氧状态,也是利用充气中的氢在钯的催化下和箱中钱残余氧化合成水的原理。该箱可调节温度,本身是孵箱或孵箱即附在其内,还可放入解剖显微镜便于观察厌氧菌菌落,这种厌氧箱适于作厌氧细菌的大量培养研究,大量培养基可放入作预还原和厌氧性无菌试验。金属硬壁型厌氧箱的抽气、充气、厌氧环境和温度等均系自动调节。

    4.厌氧盒:原理同厌氧袋,有成品销售。
    5.
生物耗氧法:在一密闭的容器内放以生物(多是植物),消耗氧气,同时产生二氧化碳,供细菌生长用。我没见过。
    6.
焦性末食子酸法:在一洁净的玻片上铺上纱布或滤纸,均匀撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速将已接种细菌的平板倒扣在上面,用融化的白蜡封边,造成一个封闭空间。焦性末食子酸与碱反应后耗氧。该法用于厌氧不严格的厌氧菌的培养,简单。如有梭状芽孢杆菌。
    7.
疱肉培养基:本身就是一个不需特殊设备的厌氧培养法。疱肉和肉汤装入大试管,液面封凡士林,造成无氧环境。


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