烟台CO2培养箱HH.CP-T二氧化碳箱

烟台CO2培养箱HH.CP-T二氧化碳箱如何用二氧化碳培养箱进行细胞复苏、传代及冻存实验一  复苏 传代

（1） 准备

   无菌超净台，酒精灯，75%酒精喷壶，二氧化碳培养箱，37℃水浴锅，离心机；培养瓶，含10%胎牛清的*培养基和基础培养基以及PBS磷酸缓冲液（提前放置超净台使平衡到室温），无菌工作服（白大褂），口罩，手套，记号笔

（2） 步骤

   1.穿好无菌工作服，带上口罩和手套，快速从液氮里取出冻存管，快速放进37℃水浴锅缓慢摇晃使细胞解冻，注意冻存管的封口膜不要破裂，防止污染。

   2.解冻后用纸擦干冻存管表面的水滴，酒精喷壶喷洒适量75%酒精消毒冻存管封口处。

   3.开超净台，点燃酒精灯燃烧片刻后（可提前准备），冻存管放超净台，换新手套，小心打开冻存管，避免污染，无菌吸管将1ml细胞全部吸出至5ml无菌EP管，补加9ml基础培养基稀释，1000rpm，离心5min使细胞沉淀，弃上清。

   4.加入新鲜配制的含10%清的培养基4ml，轻轻混匀，用吸管将细胞移至25T培养瓶。

   5.平躺放置培养瓶，8字形混匀后，置于37℃，5%二氧化碳培养箱培养。

   6.培养24小时后，显微镜观察细胞（贴壁细胞）贴壁后，小心更换培养基，根据不同细胞的生长状态进行传代培养，培养瓶上标记：操作者，时间，细胞类型。

烟台CO2培养箱HH.CP-T二氧化碳箱技术参数:

推荐的二氧化碳培养箱使用注意事项

　　1、二氧化碳培养箱未注水前不能打开电源开关，否则会损坏加热元件。

　　2、培养箱运行数月后，水箱内的水因挥发可能减少，当低水位指示灯（WLow12）亮时应补充加水。先打开溢水管，用漏斗接橡胶管从注水孔补充加水使低水位指示灯熄灭，再计量补充加水（CP-ST200A加水1800ml，CP-ST100A加水1200ml），然后堵塞溢水孔。

　　3、二氧化碳培养箱可以做高精度恒温培养箱使用，这时须关闭CO2控制系统。

　　4、因为CO2传感器是在饱和湿度下校正的，因此加湿盘必须时刻装有灭菌水。

　　5、当显示温度超过置定温度1℃时，超温报警指示灯（OverTemp7）亮，并发出尖锐报警声，这时应关闭电源30分钟;若再打开电源（温控）开关（Power20）仍然超温，则应关闭电源并报维修人员。

　　6、钢瓶压力低于0.2MPa时应更换钢瓶。

　　7、尽量减少打开玻璃门的时间。

　　8、如果二氧化碳培养箱长时间不用，关闭前必须清除工作室内水分，打开玻璃门通风24小时后再关闭。

　　9、清洁二氧化碳培养箱工作室时，不要碰撞传感器和搅拌电机风轮等部件。

　　10、拆装工作室内支架护罩，必须使用随机扳手，不得过度用力。

　　11、搬运培养箱前必须排除箱体内的水。排水时，将橡胶管紧套在出水孔上，使管口低于仪器，轻轻吸一口，放下水管，水即虹吸流出。

　　12、搬运二氧化碳培养箱前应拿出工作室内的搁板和加湿盘，防止碰撞损坏玻璃门。

　　13、搬运培养箱时不能倒置，同时一定不要抬箱门，以免门变形。

         二氧化碳培养箱是免疫学、肿瘤学、遗传学及生物工程所必须的关键设备，广泛应用于微生物、农业科学、药物学的研究和生产。